Fase preparatoria
La prima metà della glicolisi è la fase preparatoria. Inizia aggiungendo un gruppo fosfato al glucosio (glucosio 6-fosfato). Poi il glucosio 6-fosfato viene convertito in fruttosio 6-fosfato. Un altro gruppo fosfato viene aggiunto trasformandolo in fruttosio -1,6-bifosfato. Il fruttosio -1,6-bifosfato viene poi diviso in due, una parte si trasforma in G3P (gliceraldeide-3-fosfato) e diidrossiacetone fosfato. Il diidrossiacetone fosfato viene convertito in G3P, lasciandoci con le due molecole di zucchero trioso G3P usate nella fase di Pay-off.
Fase di pagamento
La seconda metà della glicolisi è conosciuta come la "fase pay-off", dal guadagno netto delle molecole ricche di energia ATP e NADH. Poiché il glucosio porta a due zuccheri triosi (G3P) nella fase preparatoria, ogni reazione nella fase pay-off avviene due volte per molecola di glucosio. Questo produce 2 molecole di NADH e 4 molecole di ATP, portando a un guadagno netto di 2 molecole di NADH e 2 molecole di ATP dalla via glicolitica per molecola di glucosio.
Sintesi: 2ATP → 4ATP + 2(NADH + H+) + 2 piruvato (produzione netta di 2ATP)
Respirazione aerobica
Le cellule che eseguono la respirazione aerobica (respirazione con ossigeno) sintetizzano molto più ATP, ma non come parte della glicolisi. Queste ulteriori reazioni utilizzano il piruvato della glicolisi.
La respirazione aerobica degli eucarioti produce circa 30 molecole aggiuntive di ATP per ogni molecola di glucosio. La glicolisi, attraverso la respirazione anaerobica, è la principale fonte di energia in molte cellule.